植物染色体原位杂交测试服务-武汉科锐诺-武汉科锐诺生物科技有限公司

植物染色体原位杂交测试服务-武汉科锐诺

武汉科锐诺生物科技有限公司

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原位杂交天

1. 重新水化和固定

1）吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分钟。

2）置换成30%的PBST溶液，放置5分钟

3）置换成PBST溶液，放置5分钟，重复一次

4）置换成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟5）用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。

蛋白酶处理与后固定（本实验不做此步）

1）用10ul/ml的蛋白酶K在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理，5体节到24小时的胚胎处理3分钟，24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶处理，发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织，以便于杂交。

2）用PBST溶液轻洗，在PBST中放置5分钟。

3）用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分钟，室温。

4）用PBST洗两次，每次放置五分钟，室温。

2. 预杂交

1）每个管中置换成大约300ulHYB－溶液，60℃水浴5分钟，避免振荡。

2）用等体积的HYB+取代HYB－。

3）60℃水浴，预杂交4小时以上。

3. 杂交

1）吸去预杂交的HYB+，加上100ul已加入探针的HYB+溶液（探针浓度约为1ng/ul）..

2）60℃ 温浴过夜。注：杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等，温度越低，探针结合越好，温度越高，背景越小。

多彩色荧光原位杂交(multicolorfluorescenceinsituhybridization，mFISH)。它用几种不同颜色的荧光素单独或者混合标记的探针进行原位杂交，能同时检测多个基因，扩大了FISH技术的临床应用。FISH技术目前主要应用于染色体和DNA水平上的病理诊断检测。染色体FISH主要检测染色体易位、缺失、重复、变异等;DNAFISH主要是检测基因突变、扩增、易位、缺失。与原位杂交技术相比，FISH更加安全、快速，特异性好、定位准确。